銀水灣論壇會議筆記|龔建森:雞白痢凝集抗原的研制
一、雞白痢的危害
雞白痢是由雞白痢沙門氏菌引起的傳染性疾病,只感染雞和火雞兩種動物,會降低種雞產蛋率,降低種蛋受精率、孵化率、出雛率和健雛率,降低后代生產性能,感染SPF雞后還會導致胚源活疫苗污染。
雞白痢沙門氏菌原本是一種獸醫界發現較早的血清型,但隨著沙門氏菌血清型命名規則的不斷完善,目前已將雞白痢和雞傷寒這2者具有共同表面抗原的沙門氏菌統稱為雞傷寒血清型,但進一步分為雞白痢和雞傷寒2種生物型,而我國的國家標準則將2者標注為“雞-雛沙門氏菌”。

1.雞白痢雞傷寒的生化鑒別
由于雞白痢、雞傷寒具有諸多相似性,需進行有效的區分。國內外對兩個病原已經研究上百年時間,傳統的鑒別方式是生化方法,主要通過四個指標:葡萄糖產氣、衛矛醇、麥芽糖和鳥氨酸脫羧,雞白痢沙門氏菌通常是陰性,雞傷寒沙門氏菌通常為陽性。但通過實驗室的大量樣本驗證,只有衛矛醇和鳥氨酸這兩個指標更具有特異性。
2.雞白痢、雞傷寒的分子鑒別
因為生化試驗非常費時費力,所以我們希望能快速區分這兩個病原,鑒于此,授課專家團隊通過基因的快速檢測建立了一系列方法,如基于pegB靶標的FRET-PCR和基于fimH靶標的PCR-HRM。
3.種雞感染雞白痢沙門氏菌對生產性能的影響
基于早期試驗數據的分析,發現種雞感染雞白痢的產蛋率和出雛率都會大幅下降,無精率和死胚率都會大幅上升。
二、雞白痢的防控
1.雞白痢沙門氏菌的感染特性

(1)禽沙門氏菌病可分為三類:第一類是雞白痢,第二類是禽傷寒,第三類是禽副傷寒。
(2)雞白痢和禽傷寒均由單一病原感染所致,因而具有獨特的感染特性。以宿主的生長史來看,分為兩個階段,以性成熟為分界線:
?在性成熟前,雛雞和青年雞感染后,雛雞一般會導致死亡,青年雞會轉變為局部感染或慢性感染,用藥有概率清除雞白痢;
?在性成熟后,雞白痢會迅速進入性器官定植并長期存活,有報道闡述,雞白痢可以在生殖系統存活70周的時間,貫穿整個產蛋周期,且此階段用藥很難清除病原,因而成年雞感染后只能執行檢疫凈化。
2.臨床常用的沙門氏菌防控產品
臨床常用的沙門氏菌防控產品一般為抗生素、噬菌體、中草藥、抗菌肽、酸化劑、植物精油、疫苗和益生菌,上述產品對于雞白痢防控而言,僅在青年雞時期有效,成年雞使用只能壓制但不能清除病原,且存在感染抗體檢測,因而不推薦使用。
3.雞白痢的最適檢疫對象
雞白痢可以檢測抗原或抗體。而對于病原的檢測花費的時間和成本較高,且針對糞便的檢測結果不能反應機體的真實感染狀況,所以國內外更傾向于檢測抗體,因此了解雞白痢抗體的生成規律以及不同檢測方法的特點是非常重要的。
較為簡便的雞白痢血清學診斷方法包括平板凝集實驗(全血/血清)、試管凝集實驗(全血/血清)和瓊脂擴散實驗(全血/血清/卵黃)。
?相較來說,平板凝集反應時間迅速(2min),是唯一可進行現場檢測的方法,檢測節點是在性成熟后;
?試管凝集反應時間較長(24h),準確性較平板凝集更高,可在實驗室檢測,檢測節點是在性成熟后;
?瓊脂擴散反應時間最長(24h~48h),準確性最高,可在實驗室檢測,檢測節點是全飼養周期。
4.雞白痢感染與凝集抗體的對應關系
在自然感染條件,不使用藥物、噬菌體、疫苗等防控產品條件下,發現雛雞產生凝集抗體的能力非常弱,而青年雞產生凝集抗體結果非常不穩定,成年雞性成熟后,病原感染后很快抗體水平會升高,所以成年雞最適合進行凝集抗體的檢測。我們國家目前從國標到行標以及地方標準,基本都是采用全血平板凝集實驗來進行雞白痢檢疫。
5.我國雞白痢凈化場評估要求
我國疫控中心制定的凈化場評估要求規定,雞白痢采取血清學抽檢,祖代以上養殖場陽性率低于0.2%,父母代場陽性率低于0.5%;連續兩年以上無臨床病例;現場綜合審查通過。

三、雞白痢凝集抗原的研制
1.優良的雞白痢凝集抗原需具備的特性
優良的雞白痢凝集抗原需具備靈敏度高、特異性強、反應速度快、凝集圖像清晰易辨、檢測結果穩定和保存期長的特性。授課專家特別提及,從長期實踐來看,保存期越長的抗原,它的穩定性越好。
授課專家提到,江蘇省家禽科學研究所自1959年建所后,即將雞白痢作為一項傳統研究項目,至今未曾間斷。上世紀60年代即開始篩選穩定性良好的雞白痢抗原制造菌種,研制靈敏、快速、特異的雞白痢平板凝集染色抗原。經過多年的研究與應用,研制的染色抗原已達到國內領先、國際先進水平。經全國22個省、市、自治區,近百個科研、教學、生產單位應用,總檢測雞數近2億羽。并在上世紀70-80年代,成功實施國內三大部級原種雞場雞白痢凈化工作,包括黑龍江省哈爾濱原種雞場、北京種禽公司原種雞場和上海市新楊種畜場。
授課專家以北京種禽公司原種雞場的雞白痢凈化舉例。該原種雞場于1974年成立于北京昌平,1978年受雞白痢困擾與江蘇省家禽科學研究所合作開始雞白痢檢疫凈化;至1979年底,基本控制消滅雞白痢,建立了我國第一個無雞白痢沙門氏菌的原種雞場;后期連續跟蹤檢疫至1986年,累計檢測種雞54622羽份,全部為陰性。專家講到,當時的種雞場無論是硬件條件,生物安全措施與管理制度與目前種雞場相比均存在較大差距,但仍可做到徹底凈化的最關鍵因素就是抗原的質量保障。
授課專家闡述了近年來該團隊在雞白痢凝集抗原的開發與應用工作,如2018年與溫氏食品集團股份有限公司合作開展自家抗原研制與應用,并在2年內將這個國內最大的黃羽肉雞育種企業完成了雞白痢的徹底凈化。在2019年,又與哈爾濱國生生物科技股份有限公司開展產品孵化,通過6年時間的努力已完成各項工藝的研究。
2.如何確保新產品的性能
主要5個方面:新菌種的核心優勢;培養與制備工藝的技術改進與優化;特異性與穩定性保證;敏感性、批間重復性、環境使用穩定性;臨床檢驗與實踐應用。
授課專家提到,未進行篩選及選育的雞白痢菌株通常O抗原含量低、抗原成分不穩定和遺傳穩定性低。為了獲得優良的抗原制造菌種,授課專家對菌種庫中保存的1000余株雞白痢沙門氏菌進行了篩選。江蘇省家禽科學研究所擁有數量豐富、時間跨度大(1953年至今)、地理分布廣的雞白痢沙門氏菌國內分離株(其為CVCC提供的雞白痢沙門氏菌參考菌株占比近80%),基于上述菌種資源,成功篩選到抗原候選菌株。同時為了方便篩選,還創新建立了配套的雞白痢沙門氏菌顯微菌落分型方法,用于區分標準型(S)、中間型(I)和變異型(V)。
3.新菌種的核心優勢
(1)涵蓋所有菌落型:YBC/yBC/Ybc
(2)涵蓋所有血清亞型:標準型、變異型、中間型
(3)抗原高表達:O抗原產量提升2.14倍。
(4)特異性表位富集:富含O9、O122、O123三種O抗原分子。
(5)遺傳穩定性強:抗原制備菌株傳代后15代后,檢測其菌落型變異率只有3.06%,其血清亞型無改變。未經此方法篩選的菌株其菌落型變異率為篩選菌株的5.65倍,血清亞型變異率為篩選菌株的8.06倍。
4.培養與制備工藝的技術改進與優化
授課專家講到,對研發產品進行了包括培養基配方篩選、最佳培養時間篩選、抗原的收獲方式優化和抗原的滅活條件優化等上百個制備工藝的技術改進與優化。
以目前商品化的抗原產品為例,其使用標準陽性血清對抗原進行標定,導致抗原濃度并不固定,可能造成檢測結果不穩定的情況,而新產品采用固定抗原濃度來達到更穩定的檢測效果。

專家提到,新產品針對雞的各種特異性質控血清進行了特異性鑒定,并且進行了敏感性、批間重復性和環境使用穩定性試驗,驗證了敏感性結果優于商品化產品2-4倍;三個批次檢測結果完全一致,重復性良好;產品的極限溫度檢測結果穩定。在臨床上進行了檢測和應用,同時將現場的全血試驗血清在實驗室進行復核。
5. 新抗原的特點
(1)特異性強(無假陽性)
(2)敏感度高(優于商品化產品1~2個稀釋度,無假陰性)
(3)反應速度快(#和+++的陽性樣品約20-30s即可凝集)
(4)凝集圖像清晰易辨(凝集顆粒明顯,底液澄清,利于判定)
(5)檢測結果穩定(批間和批內檢測結果完全一致)
(6)保存期長(可4-8℃穩定保存5年以上)
(7)使用劑量低(每個反應只需25μL,僅商品化產品一半)
四、總結
本次授課專家的報告圍繞雞白痢展開,首先闡述了理論與技術支撐:系統梳理了雞白痢的危害、鑒別方法及防控邏輯,明確了雞白痢與雞傷寒的關聯與區分,為相關疾病的基礎研究和臨床診斷提供了清晰的理論框架和技術參考。其后,做了生產實踐指導:針對種雞感染雞白痢對產蛋率、孵化率等生產性能的影響,以及不同生長階段的感染特性,提出了具體的檢疫對象、方法和凈化標準的講解,為養殖場科學防控雞白痢、提升生產效益提供了可操作的實踐方案,助力行業降低經濟損失。最后,展示了技術創新與應用價值:詳細介紹了雞白痢凝集抗原的研發成果,尤其是新抗原在特異性、靈敏度、穩定性等方面的突破,為我國雞白痢的長期防控和行業標準化提供了關鍵技術保障,為雞白痢的凈化提供了很好的手段,對推動家禽養殖業的健康可持續發展具有重要現實意義。
會議筆記由哈爾濱國生生物科技股份有限公司王美嬌記錄整理。








